菌种传代：保持生物活性的关键步骤

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菌种传代是微生物学实验中一项基础且关键的操作，旨在通过连续培养将微生物菌种从一代转移到下一代，以维持其生命活力、遗传特性及实验所需的生理状态。此过程对于菌种保藏、遗传学研究、药物筛选、发酵工艺开发等多个领域至关重要。菌种传代技术不仅是微生物学实验中的关键操作，更是保障菌种资源可持续利用的重要手段。通过精细的传代管理与保藏策略，可以确保菌种资源的丰富性、多样性和稳定性，为微生物学及相关领域的发展提供有力支撑。

一、菌种传代的定义与意义

定义：菌种传代是指将已有的纯种菌株在新鲜培养基上进行繁殖，使其生长分裂成新的菌种，并保持其遗传特性的操作。培养基可以为固体、液体或半固体，根据不同菌种选择合适的培养基。

意义：菌种传代对于保持微生物的纯度和遗传特性、维持微生物活力、保藏菌种资源至关重要。随着微生物学的发展，菌种传代对于科学研究、工业生产以及生物安全和环境保护都具有重要意义。

二、菌种分类

1.初级细胞库：又名原始细胞库，经鉴定可以用于科研或工作生产，并由原始细胞分裂生长形成的均一稳定的细胞群体，用于建立主细胞库。

2.主细胞库：经原始细胞库传代增殖后形成的细胞群体，用于建立工作细胞库。主细胞库的质量标准应高于初级细胞库。生产企业的主细胞库传代次数最多不得超过两代。

3.工作细胞库：经主细胞库细胞传代增殖，达到一定代次水平的细胞群体。工作细胞库一般分装于冷冻管中，于超低温冰箱（-80℃）或液氮中冷冻保存。工作细胞库复苏后的传代次数应不超过批准的该细胞用于生产的最高传代次数，最高传代次数应根据研究结果确定，不得超过国际认可的最高传代次数。生产企业的工作细胞库必须限定为一代。《中国药典》2020年版规定，试验用菌株的传代次数不得5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代）。

三、菌种传代的操作步骤

1.准备：根据不同的菌种选择合适的培养基，如琼脂或液体培养基。

2.传代：以琼脂培养基为例：准备好用于传代的冷冻管，无菌条件下用无菌水将冷冻管稀释至培养需要的浓度，用吸管吸取适量菌悬液加入培养基中，均匀涂布，动作应轻缓。操作结束后将培养基密封包扎，放于恒温培养间中培养。

3.观察：定时观察记录菌种在培养基上的生长情况，如菌落形态、颜色和密度等。

4.保存：培养周期结束后将合格的菌种培养基装袋放于冷藏冰箱中保存，用于科研或工业生产。

5.维持传代：重复上述步骤，将菌种传代到新的培养基上，以保持其遗传特性。注意传代次数不得超过规定的最高传代次数。

四、菌种传代的注意事项

1.无菌操作：在菌种传代过程中，应保持无菌操作，避免外来杂菌的污染。

2.控制传代次数：实验室使用的工作菌种一般不可超过5代，防止过度传代造成菌种变异。

3.定期检查：定期对保存的菌种进行检查，确保其纯度和活性。超出保存周期的菌种培养基应及时销毁，不宜继续使用。

4.妥善保存：日常使用菌种应冷藏保存，工作细胞库应冷冻保存。保存菌种的冰箱不得放置食品和易挥发性药品，放置菌种应有专用的冰箱，并上锁管理。

五、菌种传代的应用

菌种传代在工业生产、科学研究以及生物安全和环境保护等领域都有广泛应用。在发酵工业中，菌种传代与保藏是确保生产过程的稳定性和产品质量的关键环节；在科学研究领域，菌种传代是基因工程、蛋白质工程、酶工程等研究的基础；在生物安全和环境保护方面，菌种传代有助于防止病原菌的传播和扩散，保障人类和动物的安全。