在实验室培养细胞的过程中,容易受到多种因素的影响造成污染,细胞污染不能被消除,但可以采取各种措施进行预防和处理。细菌污染便是实验室细胞污染的常见现象之一。
一、细菌污染原因分析
细胞的细菌污染主要有以下几种:
1. 革兰氏阳性菌:大肠杆菌、枯草杆菌、假单胞菌等;
2. 革兰氏阴性菌:白色葡萄球菌等。
细菌污染细胞后,会导致细胞的培养液变浑浊、ph发生改变、有刺鼻气味等,严重时还会导致细胞死亡,影响正常实验进程。因此在发生细菌污染后,应第一时间调查原因,及时解决问题,避免污染进一步扩大。
细胞发生细菌污染的常见原因有:
1. 人员:人员在操作规程中没有按规定穿戴好无菌服和手套、口罩、头套等防护用品;
2. 仪器:培养皿、吸管、细胞培养箱等设备仪器在使用前没有进行灭菌或灭菌过程中存在死角;
3. 培养基:在培养基的配制过程中人员裸手接触培养基;培养基的高温灭菌过程中温度和压力没有达到灭菌要求;培养过程中培养瓶密闭不严;
4. 规章制度:规章制度的制定过程中有漏洞,忽视了某些操作环节的灭菌重要性;
5. 环境:环境的日常灭菌频次低、灭菌不充分、没有选择合适的灭菌方法等。
二、实验室应从哪些方面入手做好细菌防控
在日常的实验中需对操作人员多加监督检查,确保穿戴符合规范,并完善相应的规章制度,便于日常指导人员操作。培养基在高温灭菌过程中温度和压力应达到规定要求;在进行培养前仔细检查培养瓶是否按要求进行包扎;定期检查灭菌设备,确保设备管道没有泄漏,设备处于正常使用期限内。
针对仪器和环境主要有以下几种灭菌方法:
1. 物理灭菌:主要指紫外线灭菌,通过紫外线作用于细菌的DNA,干扰细菌DNA的复制和转录从而杀死细菌。紫外线灭菌具有高效、广谱的优点,但容易在灭菌过程中留有死角,并且随着使用时间的增长紫外线的穿透力会逐渐减弱,且会对人体健康造成一定的危害。
2. 化学灭菌:包括臭氧灭菌、消毒剂灭菌等。
①臭氧灭菌:臭氧灭菌可杀灭细菌、病毒、孢子等微生物,且作用迅速、不容易产生二次污染、经济性价比高,但需注意臭氧的使用需在一定的浓度范围内,否则也会危害人体健康,对人体的呼吸道和消化道有一定的刺激作用;
②消毒剂灭菌:常用的消毒剂主要有75%乙醇、过氧化氢、新洁尔灭、杀孢子剂等。消毒剂可大规模喷洒擦拭,不留死角。值得注意的是75%乙醇、过氧化氢和新洁尔灭无法杀灭孢子等耐受力强的微生物,杀孢子剂可以杀灭孢子等耐受力强的微生物,但需按照对应的比例使用才能达到更好的消毒效果。
三、消毒剂该如何选择
中华人民共和国国家标准GB/T27405-2008《实验室质量控制规范 食品微生物检测》中对消毒剂有如下规定:
针对实验室选择消毒剂时,需同时具备紫外线和臭氧灭菌高效、广谱的优点,还应尽可能地无污染,对仪器设备等基本无腐蚀性,同时不危害人体健康,便于人员操作。奥克泰士帮您解决细菌、孢子污染实验室细胞的问题。
奥克泰士消毒剂主要的活性物质是过氧化氢和微量的银离子,经奥克泰士处理后的物体表面中银离子的含量极其微量不可见且无毒,不会对环境产生二次污染。由过氧化氢分离的元素氧可直接攻击微生物的细胞壁,破坏细胞壁使银离子与微生物的酶结合,从而使微生物失去活性,杀菌率可达99.999%。奥克泰士可有效杀灭大肠杆菌、葡萄球菌、孢子、真菌等实验室常见污染源,为实验室细胞培养提供安全保障。
四、日常防控措施
实验室发生细菌污染时,不仅会影响细胞的正常生长,严重时还会污染环境,危害人体健康,因此选择合适的消毒方法定期对实验室开展消毒灭菌工作至关重要。同时应制定并执行实验室卫生管理制度,确保实验室内的清洁和卫生;定期对实验室进行清洁和消毒处理,包括桌面、地面、设备等;加强对实验人员的卫生教育和监督管理,从日常入手做好细菌防控。
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